Слайды продемонстрированные во время презентации

 

 

Рис. 2. Электронная микроскопия тонких участков производящих вирус лимфоцитов пуповины. Вставка показывает различные стадии частицы, почкующейся на поверхности клетки.

Это электронный микроснимок, опубликованный Монтанье (Montagnier). На этом слайде широкая непрерывная структура в нижней половине представляет собой часть лимфоцита пуповины. На ее поверхности имеется несколько пузырьков (почек), а рядом несколько бесклеточных частиц. Говорилось, что эти формы являются производящими вирус лимфоцитами пуповины, на которых выявлены различные стадии почкования частицы на поверхности клетки.

Монтанье  (Montagnier) классифицировал эти частицы как частицы С-типа подсемейства Онковирус. Фактически в отрывке из работы они названы типичным опухолевым вирусом С-типа (= Онковирус).

Позднее стало известно, что этот отрывок из работы Монтанье (Montagnier) написал Галло (Gallo), однако кроме того, в своих собственных работах 1984 года по выделению штамма Галло (Gallo) также отнес новый ретровирус к тому же роду частиц типа С.

 

 

 

 

Рис. 4. Экстраклеточные вирионы. Целый и почкующийся вирион, расположенный около базальной пластинки (b) (х 9 000). Справа расположено изображение двух вирионов в увеличенном масштабе (х 90 000)

Перед вами ретровирусная частица, частица С-типа, которая содержится в большинстве плацент. Слева Снимок слева увеличение малой мощности, снимок справа высокомощное увеличение.

Панем С. (Panem S). Проявление вируса С-типа в плаценте. (C Type Virus Expression in the Placenta). Curr Top Pathol 1979; 66:175-189

 

 

 

 

Данный снимок представляет собой изображение плацентарной частицы С-типа рядом со снимком частиц ВИЧ, обнаруженных Монтанье в 1983 году. В 1983 году о них сообщалось как о типичных частицах С-типа.

Кто знает, возможно ли, чтобы такие частицы содержались или были произведены в культурах Монтанье (Montagnier), даже если бы они были приготовлены без лимфоцитов из BRU? Без процедур контроля ответ дать невозможно.

 

 

 

 

Данные исследования показали, что частицы ВИЧ присутствовали у 18/20 (90%) больных с увеличением лимфоузлов, связанным со СПИДом. Однако идентичные частицы были обнаружены у 13/15 (87%) больных с увеличением лимфоузлов, не связанным со СПИДом, не подверженных риску заболеть СПИДом.

 

 

 

 

Этот слайд был опубликован в 1961 году и подтверждает, что возможно сделать электронный микроснимок в диапазоне 1,16 г/мл и показать очищенные ретровирусные частицы. Это частицы вируса саркомы Рауса, животного ретровируса, открытого Раусом в 1911 году. Заметьте, что в отличие от множества снимков ВИЧ, этот снимок имеет измерительную линейку 1000 нанометров.

В течение более двадцати лет мы просим предоставления подобных свидетельств в отношении ВИЧ. То есть доказательство того, что Монтанье и Галло назвали очищенным вирусом, представляет собой ретровирусные частицы и ничего, кроме ретровирусных частиц.

Ответа мы так и не получили, однако в 1997 году две группы исследователей, одна франко-германская, а другая из Национального института рака США, опубликовали по работе в мартовском выпуске журнала Virology.

 

 

 

 

Итак, перед вами первый электронный микроснимок, полученный франко-германской группой*, показывающий, что фактически содержится в этом материале.

Верхняя часть, обозначенная (a), представляет собой диапазон 1,16 г/мл из инфицированных клеток, то есть ВИЧ-инфицированных клеток Н9. Эта часть в середине, обозначенная (b), опять же представляет собой диапазон 1,16 г/мл, снова из инфицированных клеток, однако на этот раз клетки были получены у обычных людей.

Нижняя часть представляет собой диапазон 1,16 г/мл, полученный из неинфицированных клеточных культур.

Не нужно быть ученым или специалистом по ВИЧ, чтобы понять, что, независимо от того, что представлено на снимках, ничего очищенного на них нет. В очищенной структуре все объекты выглядят одинаково. Например, представьте себе ящик яблок. На самом деле авторы этой работы дали первой части (а) название Очищенные везикулы из инфицированных клеток H9, а второй части (b) активированные мононуклеарные клетки периферической крови. Несмотря на то, что работа посвящена препаратам ВИЧ, авторы не назвали свои снимки очищенным ВИЧ, потому что не могли этого сделать. Иными словами, после четырнадцати лет исследований сами эксперты в области ВИЧ подтверждают, что такой вещи, как очищенный ВИЧ, не существует.

Что мы увидим, если рассмотрим снимки более подробно? Большая часть материала представляет собой клеточные фрагменты, а некоторые участки авторы пометили стрелками, указывающими на очень малое количество частиц, которые они считают ВИЧ. Но если взглянуть на нижний участок, являющийся препаратом неинфицированных клеток, на нем имеются три частицы, которые мы обвели синим, похожие на те, что, по мнению авторов, представляют собой ВИЧ.

Рассматривая участки (а) и (b), сложно решить, на основании каких именно критериев авторы классифицировали частицы как ВИЧ. И какими бы ни были эти критерии, частицы не обладают всеми морфологическими характеристиками, которыми должны обладать ретровирусные частицы.                         

Одним из первых и однозначных параметров частиц, помеченных стрелками, является их диаметр. Мы измерили все эти частицы микрометром и установили, что их средний диаметр составляет 136 и ни одна из них не имеет диаметра менее 120 нм. Таким образом, эти частицы слишком велики, чтобы подпадать под определение ретровирусной частицы. Напомню, что диаметр ретровирусной частицы составляет 100-120 нанометров**.

Другой вопрос состоит в том, что химические вещества, использованные в культурах, изображенных на участках (a) и (b), как и те, которые, как мы видели, использовались на предыдущих слайдах, включая митогенный реагент фитогемагглютинин, не использовались в культурах на нижнем участке. Это означает, что к культурам применялся разный подход и единственное, что их объединяет, это добавление слова ВИЧ. Следовательно, нижний участок не является контрольным образцом, соответствующим требованиям. Учитывая, что ретровирусные частицы могут появляться даже спонтанно или под воздействием условий культуры, в связи с тем, что авторы не добавляли эти химические вещества, в том числе фитогемагглютинин, нельзя исключать возможность того, что частицы на нижнем участке могли в противном случае оказаться идентичными участкам (а) и (b).

ДОПОЛНЕНИЕ

Надпись под данным электронным микроснимком гласит:

РИС. 2. Очищенные препараты ВИЧ-1 заражены клеточными везикулами. Очищенные везикулы из супернатантов инфицированных клеток Н9 (a) и активированных мононуклеарных клеток периферической крови (b) (участок 6 на рис. 1a и участок 5 на рис. 1b, соответственно) или из неинфицированных клеток H9 (c) (участок 6 на рис. 1e) были обработаны таким образом, чтобы провести их анализ под электронным микроскопом, в соответствии с разделом Материалы и методы. Клеточные везикулы предположительно являются гетерогенной популяцией как проницаемых для электронов, так и непроницаемых для электронов везикул, ограниченных мембраной, размер которых составляет примерно от 50 до 500 нм. (Первоначальное увеличение 136 000).

Вирионы помечены стрелками.

*Совместно с  франко-германской группой исследование вели: Центр иммунологии Марсель-Люмини (Centre dImmunologie de Marseille-Luminy), Кейс 906, 13288 Марсель, Франция, и Институт Роберта Коха (Robert Koch Institute), Нордуфер 20 D13353, Берлин, Германия

** Согласно пересмотренной в 2000 году таксономии ретровирусов, раздел Морфология, вирионы представляют собой сферические капсулированные частицы диаметром 80100  нм.   Таким образом, диаметр ВИЧ-частиц, выявленных франко-германской группой, еще дальше отстоит от диаметра, указанного в определении.

См. http://www.virustaxonomyonline.com/virtax/lpext.dll/vtax/agp-0013/rtr03/rtr03-sec1-0001?f=templates&fn=document-frame.htm&2.0#rtr03-sec1-0001

 

 

 

 

Ни одна из частиц, выявленных при франко-германском исследовании, не имеет наростов или боковых тел, которые легко увидеть на снимке слева и которые также обозначены на снимке справа. Это означает, что частица, обнаруженная франко-германской группой, не может быть ретровирусом.

 

 

 

 

Сейчас мы видим данные, опубликованные доктором Джулианом Бессом и его коллегами из Америки.*

На этом электронном микроснимке, также разделенном на три части, представлены результаты их попыток выделить штамм ВИЧ.

На верхнем участке, обозначенном MN, заснят материал градиента плотности, полученный из инфицированных клеток H9.  Средний участок, обозначенный CL4, представляет собой инфицированный клон клеток H9, названный CL4. Эта культура, произведенная от другой культурой, с которой производились радикальные манипуляции, в том числе выращивание в сокультуре с клетками, подвергавшимися сильному облучению и практически мертвыми. На нижнем участке, также обозначенном MV, снова представлен диапазон градиента плотности из неинфицированной культуры.

И снова, как вы видите, ничего не было очищено. На самом деле сложно разглядеть какие бы то ни было различия между этими тремя участками, хотя кажется, что на участке CL4 частиц больше. В MN и CL4 крайне сложно найти частицы с морфологией ретровирусов.

Частицы, помеченные MV, представляют собой микровезикулы. Это клеточные структуры, а не ретровирусные частицы, и большая часть материала состоит из микровезикул и другого клеточного материала.

ДОПОЛНИТЕЛЬНО

*Совместно с американскими авторами работу вели:

Программа по вакцине против СПИДа, SAIC, Национальный институт рака Центр исследований и разработок в области рака Фредерика, Фредерик, Мэриленд, 21702-1201

 

 

 

 

Бесс и его коллеги также провели эксперимент, который не проводился ранее.

Они извлекли белки из трех диапазонов, MN, CL4 и MV, и перенесли их в гель. То есть в их распоряжении имелся гель, содержащий все белки в MN, еще один с белками в CL4 и третий со всеми протеинами в MV.  Они воздействовали на каждый гель электрическим полем для того, чтобы отделить белки в каждом геле друг от друга. Это стандартная лабораторная техника, известная как электрофорез. При этом процессе в нижней части полосы прилагается положительное напряжение 100 Вольт, и, поскольку протеины имеют отрицательный заряд, они начинают двигаться вниз сквозь гель. Белки с более высоким молекулярным весом перемещаются медленнее и на меньшее расстояние, в то время как наименее легкие белки перемещаются быстрее и на большее расстояние. Через несколько часов белки разделяются в зависимости от молекулярного веса и заряда. Затем гели окрашиваются краской, характерной для конкретного белка, которая показывает отдельные белки как ряд черных горизонтальных линий. Следует отметить, что толщина или уровень темноты полосы определяется тем, какое количество белка находится в полосе. В одной полосе может быть больше одного белка. Все, что нужно, это чтобы один или более белков имели одинаковый или практически одинаковый молекулярный вес. Белки помечаются белками-маркерами известного молекулярного веса, которые вставлены в левой части слайда. Полоса А представляет собой неинфицированную полосу, полоса В полосу инфицированных клеток H9,  а полоса С инфицированную полосу CL4.

Наша интерпретация этого эксперимента с электрофорезом: единственное различие между двумя полосами состоит в некоторых изменениях уровня темноты полос. (Не следует путать полосы, возникающие при электрофорезе, которые являются белками, с полосами в градиенте плотности, которые являются частями градиента плотности, имеющими одинаковую плотность и, следовательно, способными концентрировать материал одной плотности. Одно и то же слово обозначает две совершенно разные вещи).

Иными словами, по нашему мнению, одинаковые белки, имеющие одинаковый молекулярный вес, присутствуют во всех образцах, подвергнутых концентрации в градиенте плотности. Инфицированные и неинфицированные. Единственное отличие между всеми этими полосами количественное, а не качественное.